时隔3年后，韩春雨发布最新科研成果篇文章

时隔3年，曾处于舆论旋涡的韩呐喊公开了一项最新分析成果。近日，韩呐喊在实刻本网站BioRxiv上刊放了一篇关于基因编辑的新评论：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE。评论共有5名所写，依次为Feng Gao， Yue Sun， Feng Jiang， Xiaoyue Bai， Chunyu Han，指导单位之外为河北科技大学基因编辑分析中会心。其中会，韩呐喊为通讯所写。据认识，科学研究中会写道的CasE是Ⅰ-E型 CRISPR复合物的质子心成分，它通过相结合特定的茎环区域原则上处理pre-crRNA，称之为 CasE Binding S，简称为CBS。CasE保守His20参与依赖性，ΔHis26-TtCse3突变的CasE（dCasE）则保住了依赖性，但仍然与其靶标紧密相结合。在该分析中会，通过将 split 放光与dCasE的N端和C-外侧（ΔHis20）融入，相相结合了已逝体RNA工具箱VN-dCasE-VC。该系统对仅在共存靶RNA时才放出放光，从而增强增益。在已逝细胞内中会进行可视化的RNA，不需要特定的亚细胞内产自。CasE-GFP和dCasE-GFP在HEK293T细胞内中会的高水准表达和之外匀产自确实CasE和dCasE简便已逝细胞内中会的RNA配置。为了测试者CasE在哺乳类细胞内中会表达时是否具有强已逝性，所写相相结合了“关闭”报告基因真核细胞内CBS-GFP-N1。它由5′-UTR中会的GFP mRNA和CasE相结合启动子（CBS）组成。当CasE被引入系统对时，GFP表达水准骤减。同时，为了进一步测试者CasE已逝性，所写还相相结合了“敞开”报告基因真核细胞内RED-16×CBS-Lin28-C1，其中会CBS插入RED聚合基因的3′-UTR区和Lin28的上游。Lin28是RNA质子保留接收器，在其3′-UTR中会具有lin28接收器的RED聚合mRNA基本上不能翻译成酶质。CBS-CasE依赖原则上切断lin28接收器并从质子释放靶mRNA使用翻译（示意图1E和示意图1F）。这些确实CasE可以相结合并切割哺乳类细胞内中会的CBS。另外，为了将dCasE-CBS相互作用设计到RNA系统对中会，所写通过将split-FP5-7与dCasE酶相结合。挖掘出一个版本，即VN-dCasE-VC很难放出放光，这可能是由于不正确的折叠或起伏不定状态，但是当与靶RNA（CBS）相结合时，可以在放光显微镜下清楚地捕捉到放光接收器，即使VN-dCasE-VC表达真核细胞内的转染剂量非常很低。接下来，所写使用VN-dCasE-VC系统对哺乳类细胞内中会过表达的β-肌动酶（β-Actin）的mRNA，VN-dCasE-VC系统对在细胞内质中会推测出强放光。此外还注意到到，向靶mRNA添加更是多CBS可缓解接收器，放光更是清晰，因此，可以通过上升CBS的数量来检测很低丰度的mRNA。总的来说，韩呐喊制作团队研制出了一种一新RNA工具箱，将其命名为VN-dCasE-VC，该系统对并不需要已逝细胞内中会没有人背景的特定RNA，通过放光将其可视化。在此之前已有两种已逝细胞内RNA成像工具箱，一种是MS2，一种是Cas13a，韩呐喊制作团队开放新的dCasE系统对，成像视觉效果由于MS2，而且，dCasE酶的组分为22kDa，几倍小于Cas13a的130kDa，dCasE的小组分更是容易放送给至体内，因此更是适合使用已逝细胞内的RNA。一位接近韩呐喊的部分人确信：“这篇评论是此前韩呐喊指导的延续，目的都是开放新基因编辑工具箱。”不过，值得注意的是，该分析在此之前刊放于实刻本网站，尚未经过理应评议，反驳，有科研部分人指出，梅西在未经理应评议的实刻本上，是为了获得梅西权。“韩呐喊下一步还会投正式期刊的。”前述部分人所述。不明白此次一新分析成果是否会再次给韩呐喊带来关注，2016年5翌年，《自然现象—生物技术开放新》刊放韩呐喊制作团队一新基因编辑技术开放新NgAgo，被媒体以“甘坐冷板凳、十年憋大招”的主人翁他设计炒作而风靡一时，以后半年，韩呐喊个人及其所在大学年末获得各类名誉和大量经费资助，但亦有欧美国家多名基因编辑领域科学家实名放确信物理结果难以段落，怀疑物理结果的事实。2017年8翌年，《自然现象—生物技术开放新》刊放并作《是该资料讲的时候了》社论，宣布撤军韩呐喊制作团队于2016年5翌年2日刊放在该期刊的科学研究。2018年9翌年，河北科技大学放布公告，韩呐喊制作团队不共存主观造假。但依据有关规定，取消韩呐喊所获得的表彰，终止韩呐喊制作团队承担的科研并收回科研经费。韩呐喊制作团队答复称，物理设计共存缺陷、分析更是进一步共存着不严谨的疑虑。有业界部分人答复：“这波之后，NgAgo这个分析方向在中会国花钱得极慢。韩呐喊他们的指导开展起来也更是为困难，连学生也没有人新招。”