Nat Neurosci:对小鼠,非人类灵长类动物和人类中功能不同的中间神经元进行时病毒操作

2021-10-13 17:03:28 来源:
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大规模的基因表达四组研究者即将迅速了解到在特定细胞会类型之前自已表示与骨骼肌精神疾病相关的DNA。认知和药物这些疾病的分析方法将需要抗病毒和操纵特定轴突免疫球蛋白的分析方法。因此,在非人类猩猩和人类之前碰触这些许多人已越发至关重要。重四组腺相关病毒感染(rAAVs)是在骨骼肌系统对之前完成DNA发送到的除此以外分析方法,对特定的轴突个体没有内在的并不需要性。系统对的减弱子挖掘出已经通过允许以单细胞会像素完成基因表达四组和表观遗传学研究者的技术的除此以外发展而得到加速。但对于减弱子并不需要的查询空间仍然很大。为了大部分我们的减弱子并不需要,创作者并不需要专门研究者Scn1a的调控态势,Scn1a是在相异轴突个体之前表示的DNA,其破坏与严重的帕金森氏症病相关。结合用以交替交替染色质分子生物学(scATAC-seq)数据的单细胞会测定与包涵种群的DNA四组保守性结合,创作者在该DNA靠近提名了十个候选调控DNA四组。创作者确定了三种减弱子,共同抗病毒表示Scn1a的轴突个体的丰富性。其之前,一种特定的略长调控DNA四组并不需要将病毒感染表示限制为表示PV的神经节之前间轴突(PV cIN)。

分析方法:四名受试者(两名未成年/两名女性,年长22-57岁)接受了一项外科治疗,外科治疗了大人脑四该组织(脊髓和艾利体)以药物耐药帕金森氏症。在所有的病例之前,每个参与者都曾接受过一次初步的治疗,摆放在硬膜下和/或深度电极完成颅内检测,以确定帕金森氏症心脏病的位置。从艾利和脊髓取300μm腌,在艾利腌之前,病毒感染的抗病毒是基底膜亚区。在传染病毒感染后7~14d对培养出来的人腌完成电生理据信。将培养出来的人腌转移到据信室。对固有膜和放电特性完成分析。大鼠分别保证在17.8–26.1℃和30–70%的全局环境温度和光照范围内。这些模板被密切联系检测和管控在野猫混居室。从麻省理工学院(MIT)的个体之前获得了一只雌性普通雌兽猴(6岁左右)。成年(2岁)雄性猕猴(macacamulatta)来自马里兰大学霍华德分校的加州第三世界猩猩研究者之前心。在小鼠人脑腌缓冲器(Zivic Instruments)上完成棒状腌,并在冰冷的人工人脑脊髓容缓冲器(ACSF)之前解剖V1神经节。经过执行后,使用使用Nova-Seq S2 100反应缓冲器试剂盒(Illumina)完成分子生物学。

结果:在前提或解剖发展前提(包括Dravet病症)检查元件成熟的现代动态的主要盲点是,在不使用转DNA动物的前提难以进入特定的细胞会类型。即使导入复杂的遗传解决方案,心目之前的PV cIN也并不需要已是靶标。难以实现它们的丰度(它们推选所有抑制性cIN的40%)并且出现得比起较晚。更国际上地说,在本研究者之前确定的减弱子透过了很强特殊临床意义的轴突个体的访问间接地。最明显的是,这些减弱剂可以通过DNA药物或调节轴突活性而潜在地用以减缓Dravet病症的衰弱症状。创作者说明了局部和全身施打可用以有效地的病毒感染发送到到大人脑。通过局部施打,可能会增加局灶性帕金森氏症,PFC功能盲点或艾利心灵盲点。相比之下,系统对性导入病毒感染可用以需要全面干预的前提,例如,纠正并不一定帕金森氏症心脏病或精神病和骨骼肌冠心病疾病。创作者的研究者断定,对调控元素的严格鉴定为药物环境之前特定细胞会类型的利用透过了路线图。重要的是,说明了我们的减弱子并不需要分析方法可推动到其他DNA。总体而言,我们挖掘出了四组合成七个针对相异轴突个体和之前枢骨骼肌系统对区域很强独具免疫的减弱剂。即使导入了严格的标准(对目标许多人的并不需要性> 90%),我们的分析方法仍很强显着的成功率(> 20%)。此外,正如比起于保守的DNA四组所预测的那样,创作者测试的减弱子集在包括人类在内的所有种群之前被证明了很强同等的并不需要性和有效地性。

Vormstein-Schneider, D., Lin, J.D., Pelkey, K.A. et al. Viral manipulation of functionally distinct interneurons in mice, non-human primates and humans. Nat Neurosci (2020).

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